人生就是搏◈◈◈！尊龙凯时官网◈◈◈，尊龙 ag◈◈◈！4◈◈◈、目的基因的检测与鉴定◈◈◈：分子检测与性状检测 ◈◈◈、目的基因的检测与鉴定◈◈◈： （1）受体生物染色体的 ）受体生物染色体的DNA是否插入了目的基因 是否插入了目的基因 方法◈◈◈： 分子杂交技术（ 之间） 方法◈◈◈：DNA分子杂交技术（DNA和DNA之间） 分子杂交技术 和 之间 2）目的基因是否转录出mRNA （2）目的基因是否转录出mRNA 方法◈◈◈：分子杂交技术（ 之间） 方法◈◈◈：分子杂交技术（DNA和mRNA之间） 和 之间 （3）目的基因是否翻译成蛋白质 ） 方法◈◈◈：抗原—抗体杂交技术 抗原和抗体之间） 抗体杂交技术（ 方法◈◈◈：抗原 抗体杂交技术（抗原和抗体之间） （4）个体水平鉴定◈◈◈：包括抗虫◈◈◈、抗病的接种实验◈◈◈， ）个体水平鉴定◈◈◈：包括抗虫◈◈◈、抗病的接种实验◈◈◈， 以确定是否有抗性以及抗性程度

　　2◈◈◈、DNA连接酶 ◈◈◈、 连接酶 将双链DNA片段“缝合”起来◈◈◈，恢复被限 片段“ 将双链 片段 缝合”起来奇虎口袋奇虎口袋◈◈◈， 制酶断开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键

　　3◈◈◈、运载体 d88尊龙人生就是博◈◈◈、 • 作为运载体必须具备四个条件◈◈◈：①能在宿 作为运载体必须具备四个条件◈◈◈： 主细胞中保存下来并大量复制◈◈◈； 主细胞中保存下来并大量复制◈◈◈；②有一个 至多个限制酶切位点◈◈◈； 至多个限制酶切位点◈◈◈；③有一定的标记基 便于进行筛选◈◈◈。 因◈◈◈，便于进行筛选◈◈◈。如大肠杆菌割质粒携 带的氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基 就可以作为筛选的标记基因◈◈◈。 因◈◈◈，就可以作为筛选的标记基因◈◈◈。④载体 应对受体细胞无害◈◈◈。 应对受体细胞无害◈◈◈。 • 常用的运载体主要有质粒（双链环状 常用的运载体主要有质粒（双链环状DNA 分子）◈◈◈、噬菌体或某些病毒◈◈◈。 ）◈◈◈、噬菌体或某些病毒 分子）奇虎口袋◈◈◈、噬菌体或某些病毒◈◈◈。

　　一◈◈◈、基因工程概念◈◈◈：P5 基因工程概念◈◈◈： 基因工程的工具◈◈◈： 二◈◈◈、基因工程的工具◈◈◈： 1◈◈◈、限制性内切酶 ◈◈◈、 2◈◈◈、DNA连接酶 ◈◈◈、 连接酶 3◈◈◈、运载体 ◈◈◈、 三◈◈◈、基因工程的一般程序

　　1◈◈◈、限制性内切酶 ◈◈◈、 能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷 能够识别双链 分子的某种特定的核苷 酸序列◈◈◈， 酸序列◈◈◈，并使每条链中特定部位的两个核 苷酸之间的磷酸二酯键断开◈◈◈， 苷酸之间的磷酸二酯键断开◈◈◈，形成黏性末 端或平末端

　　3◈◈◈、将目的基因导入受体细胞——转化 d88尊龙人生就是博◈◈◈、将目的基因导入受体细胞 转化 导入植物细胞◈◈◈：农杆菌转化法◈◈◈、 ①导入植物细胞◈◈◈：农杆菌转化法◈◈◈、基因枪 法和花粉管通道法等◈◈◈； 导入动物细胞◈◈◈： 法和花粉管通道法等◈◈◈；②导入动物细胞◈◈◈： 显微注射技术◈◈◈， 显微注射技术奇虎口袋◈◈◈，即采用显微注射仪将目的 基因注入受精卵◈◈◈； 导入微生物细胞◈◈◈： 基因注入受精卵◈◈◈；③导入微生物细胞◈◈◈：转 化法d88尊龙人生就是博◈◈◈。早期用原核生物作为受体细胞◈◈◈，以 化法◈◈◈。早期用原核生物作为受体细胞◈◈◈， 大肠杆菌应用最广◈◈◈。 大肠杆菌应用最广◈◈◈。一般是将细菌用氯化 钙处理制成感受态细胞◈◈◈， 钙处理制成感受态细胞d88尊龙人生就是博◈◈◈，再与重组表达载 体DNA分子混合◈◈◈，在一定温度下完成转化 分子混合◈◈◈， 分子混合 标记基因表达性状代表导入成功◈◈◈。 过程◈◈◈。 （标记基因表达性状代表导入成功d88尊龙人生就是博◈◈◈。）

　　• • • • 1◈◈◈、目的基因的获取 ◈◈◈、 ①从基因文库中获取 利用PCR（多聚酶链式反应）技术扩增目的基因 ②利用 （多聚酶链式反应） 目的——获取大量的目的基因◈◈◈；原理 获取大量的目的基因◈◈◈； 双链DNA的 目的 获取大量的目的基因 原理——双链 双链 的 复制◈◈◈；条件——需要 需要DNA模板◈◈◈、引物◈◈◈、四种脱氧核苷 模板◈◈◈、 复制◈◈◈；条件 需要 模板 引物◈◈◈、 耐高温的DNA聚合酶和酶促反应所需的离子◈◈◈，同 聚合酶和酶促反应所需的离子◈◈◈， 酸◈◈◈、耐高温的 聚合酶和酶促反应所需的离子 时还要控制温度◈◈◈；过程——高温变性◈◈◈、低温复性和中温 高温变性◈◈◈、 时还要控制温度◈◈◈；过程 高温变性 延伸◈◈◈。 延伸◈◈◈。 人工合成◈◈◈：如果基因比较小◈◈◈、核苷酸序列已知◈◈◈， ③人工合成◈◈◈：如果基因比较小◈◈◈、核苷酸序列已知◈◈◈，可以 通过DNA合成仪用化学方法直接合成◈◈◈。 合成仪用化学方法直接合成◈◈◈。 通过 合成仪用化学方法直接合成

　　2◈◈◈、重组载体的构建（基因工程的核心） ◈◈◈、重组载体的构建（基因工程的核心） • 一个基因表达载体的组成◈◈◈：目的基因◈◈◈、 一个基因表达载体的组成◈◈◈：目的基因◈◈◈、 启动子◈◈◈、终止子和标记基因等◈◈◈。 启动子◈◈◈、终止子和标记基因等奇虎口袋d88尊龙人生就是博◈◈◈。 • 在体外进行 • 用同一种限制性内切酶切割载体 • 通过 通过DNA连接酶连接目的基因和载体 连接酶连接目的基因和载体